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土壤纤维素酶(Solid-cellulase,S-CL)活性测定试剂盒说明书

点击次数:399 日期:2018/12/3 16:27:37

土壤纤维素酶(Solid-cellulase,S-CL)活性测定试剂盒说明书

分光光度法 50/24

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

S-CL主要来源于土壤微生物,S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。

测定原理:

采用蒽酮比色法测定S-CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯、硫酸(不允许快递)

和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:甲苯10mL×1 瓶,4℃保存;(自备)

试剂二:液体6mL×1 瓶,4保存;

试剂三:液体40mL×1 瓶,4℃保存;

试剂四:粉剂×1 瓶,4保存; 临用前加入5mL 蒸馏水和45mL 浓硫酸充分溶解待用。

样品处理:

新鲜土样自然风干或37 度烘箱风干,过30~50 目筛。

加样表和测定步骤:

对照管 测定管

风干土样(g 0.1 0.1

试剂一 (μL) 100 100

振荡混匀15min

试剂二(μL  180

试剂三(μL  740 740

蒸馏水(μL  360 180

37℃振荡反应3h 后,90℃水浴15min(盖紧,防止水分散失),冷却后

8000g 25℃离心10min,取上清,得糖化液

糖化液 (μL) 350 350

试剂四 (μL) 650 650

混匀, 90℃水浴10min(盖紧,防止水分散失),冷却,620nm 处蒸馏水调零,测定吸光值

A,计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。

S-CL 活力计算:

标准条件下测定的回归方程为y = 5.018x - 0.0462x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。

单位的定义:每天每g 土样中产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

S-CL 活力(mg/d/g)=(ΔA+0.0462) ÷5。018×V 反总÷W÷T =19。1×(ΔA+0。0462)

T:反应时间,3h=1/8d V 反总:反应体系总体积:1。2mLW:样本质量,0.1g

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