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碱性磷酸酶染色液

点击次数:111 日期:2019/6/12 14:38:34

碱性磷酸酶染色液
产品简介:
     碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮,还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。
     碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法),其原理是在pH9.2~9.8的碱性条件下细胞内碱性磷酸酶可使 AS-BI 磷酸盐水解,释放出磷酸与萘酚,后者与偶联重氮盐生成有色产物,定位于细胞质中,该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色, 碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨,结果较金属盐沉淀法可靠。
产品组成:
产品
3*10ml
 3*20ml
Storage
试剂(A):ALP固定液
100ml
20ml
RT 避光
试剂(B): ALP 孵育液
B1:AS-BI染色液
3*2ml
5*2ml
-20℃避光
B2:FBB染色液
5ml
10ml
4℃避光
临用前,按 B1:B2=1:1 比例混合,即为 ALP 孵育液,即配即用。
试剂(C):核固红染色液
10ml
20ml
4℃避光
使用说明书
         1份
自备材料:
1、载玻片、湿盒
2、显微镜
3、4%多聚甲醛固定液(备选)
操作步骤(仅供参考):
1、血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蜡切片无需固定),水洗。
2、滴加配制好的 ALP 孵育液,放入湿盒中避光孵育15~20min,水洗。
3、入核固红染色液复染 3~5min。
4、水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。
(二) 贴壁培养细胞
1、取6孔板或其他容器培养的细胞,弃液,PBS清洗干净。
2、加4%多聚甲醛固定10~20min,PBS 清洗。
3、滴加配制好的ALP孵育液,放入湿盒中避光孵育15~20min,PBS清洗。
4、入核固红染色液复染0.5~3min。
5、PBS 清洗、镜检。
染色结果:
ALP 活性部位
蓝色
细胞核
红色(核固红)或绿色(甲基绿)
 
血液、骨髓涂片结果判断:
一般以积分报告结果,根据100个中性粒细胞阳性颗粒进行 0~4+计分。
细胞分值
染色特点
0
无颗粒
1
稍有颗粒
2
中等程度颗粒
3
多数颗粒
4
充满颗粒
临床意义:
1、类白血病反应积分明显增高,未经治疗的慢性粒细胞白血病积分明显减低。
2、急性细菌性感染积分明显增高,病毒性感染积分多正常或减低。
3、再生障碍性贫血积分常增高,PNH、MDS 积分常减低。
注意事项:
1、AS-BI 染色液易失效,应避免反复冻融,临用前低温缓慢溶解,不可用温水或热水助溶。
2、ALP 孵育液易失效或降低阳性强度,即配即用,不宜久置。
3、血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜,薄厚适宜,及时固定,否则会影响酶的活性。
4、培养细胞染色操作过程中,清洗、染色等步骤都应轻微,以免损伤或丢失细胞。
5、培养细胞或细胞爬片染色建议采用 4%多聚甲醛固定液,ALP 固定液更适用于血液或骨
髓细胞图片的固定,染色时间应根据具体细胞特性而异。
有效期:12个月有效。

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